摘要：第二组活细胞染料由远红外染料组成，如SiR-DNA™、Syto61™、Draq5™或Vybrant®Dyecycle™Ruby。SYTO61与超分辨显微镜兼容，但其高背景荧光和毒性使其不具有吸引力，SiR-DNA信号在多次暴露于激发光下时仍然很强，在稳定性测试中，在140次暴露/时间点记录后，染料保持了其原始强度的70%。

目前市面上有几种DNA荧光探针，如溴化乙锭（EB）、DAPI、Hoechst™和远红色染料，如SiR-DNA™ (SiR-Hoechst*) 、Syto61™、Draq5™或Vybrant®Dyecycle™Ruby。目前，在活细胞的DNA染色中，有两组染料。第一组是Hoechst系列，它们具有细胞渗透性和荧光性（即低荧光直到结合靶DNA），但由于340-360nm范围内短紫外-蓝色波长激发的要求，它们具有相当的毒性。

第二组活细胞染料由远红外染料组成，如SiR-DNA™、Syto61™、Draq5™或Vybrant®Dyecycle™Ruby。这些染料克服了前一组光谱范围的限制，允许使用波长约为650nm、发射波长约为700nm的低能激发光。这种光具有最小的光毒性（SiR-Tubulin™和SiR-Actin™）并且细胞或组织样品在该光谱范围内不吸收光也不自发荧光，这使得在厚样本中有更深处成像成为可能。

相比之下，DAPI和溴化乙锭不具有细胞渗透性，DAPI需要短的紫外波长激发，EB是蓝光波长，在350 nm范围内非常有很好的活力，这两种染料活细胞成像超过1-10分钟，会对活细胞造成光损伤（氧化）。此外，在这个光谱范围内，组织和细胞具有很高的吸收率和自发荧光。因此，很难在组织样本的深处成像。最后，由于细胞暴露在激发光下的时间有限，这些染料不适合超分辨率分析，且溴化乙锭会导致细胞发生突变。

SiR-DNA™（SiR–Hoechst）是基于荧光团硅罗丹明（SiR）和DNA小槽粘合剂双苯甲酰亚胺（Hoechst）组合而成，它比远红外染料组其他染料更具优势。Syto61™、Draq5™或Vybrant®Dyecycle™红宝石染料的问题在于：它们要么在厂家建议使用的浓度下对细胞显示出强烈的毒性作用（细胞停止分裂或死亡），而SiR-DNA可以在8小时的正常实验时间内持续使用，而且可能更长。Syto61™、Draq5™或Vybrant®Dyecycle™等红宝石染料也在活细胞的DNA以外的其他结构上产生强烈的非特异性信号。SYTO61与超分辨显微镜兼容，但其高背景荧光和毒性使其不具有吸引力，SiR-DNA信号在多次暴露于激发光下时仍然很强，在稳定性测试中，在140次暴露/时间点记录后，染料保持了其原始强度的70%。

SiR–Hoechst（SiR-DNA™） 和其他远红外DNA染料长时间活细胞成像对比图，显示SiR–Hoechst的 低毒性及荧光稳定性

市面上几种常见DNA染料对比

注：SiR-DNA™是Spirochrome SA公司的商标 (瑞士)

Vybrant® DyeCycle™ Ruby stain 和Syto61™是美国Thermo Fisher Scientific公司的商标

DRAQ5™是Biostatus公司商标

Hoechst™是美国Sanofi公司商标

SiR-DNA™的主要发展方向是将荧光特性、高DNA特异性、低毒性与远红外激发/发射范围相结合。此外，由于其稳定性和对远红光的特性，探针在超分辨显微镜（STDE和SIM）中表现非常好。因此，SiR-DNA™是一种优良的探针，其性能与SiR-tubulin和SiR-actin一样优秀。

在显微镜观察和高通量筛选过程中，SiR-DNA™可以在不受紫外线刺激的情况下进行简单的核复染。在流式细胞术过程中，SiR-DNA™可以直接用于血液/BM的表型分析和细胞DNA含量分析，而无需红细胞溶解或固定、渗透或RNase处理等步骤。

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文章来源：每日生物评论

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