其中，BP 克隆酶混合物对attB 位点和attP位点进行重组，产生attL和attR位点：而LR克隆酶混合物则催化逆反应(图4-1A)。 每-种重组反应过程都十分精确，没有核苷酸的增加或者丢失。

att位点的识别是非常特异的(例如，BP克隆酶从不使用attL或attR位点)，因此每一个重组反应只能产生一组衍生物。

四种类型的att位点以在核心25bp“识别区域”任意- -侧是否存在/不存在“手臂”来区分(图4-1B)，手臂包含有重组酶的相互作用位点，在识别区域中有一个7bp的“非对称性重叠”，它是DNA进行剪切和重新组合的位点(图.4-1C)。

在25bp的识别区域中引入核苷酸改变(图4-1C)能够产生只能彼此间相互重组的att位点亚型(即attBl和attPl位点发生重组，但是不能和attP2或attP3位点发生重组)。这些不同系列的att位点有助于每个DNA片段在克隆时单向克隆入每个载体(图4-2) (即.通过在任意- -侧末端 放置不同的altB位点实现)。

对于每-一个目的DNA片段(如启动子、可读框、3'UTR)，首先需要通过BP Gateway克隆反应克隆到“供体载体”从而构建“入门克隆”(图4-2)。

初始通常采用PCR方法以约50bp的长尾引物扩增含有可读框或者调控序列的DNA片段，该引物的3'端部分为目的DNA序列特异性部分，5'端尾部含有适宜的attB位点：随后利用相匹配的attP位点将该PCR产物转移到供体载体中，