關於大腸菌羣平板計數法還有哪些困惑？

大腸菌羣也是經常用來衡量食品衛生情況的重要指標，因此大腸菌羣檢測是食品微生物實驗室進行的常規檢測項目之一，絕大部分食品都會要求檢測的項目。在食品微生物實驗室裏，大腸菌羣和菌落總數的檢測頻次應該是最高的，但檢測過程中總會有一些小問題困擾着大家，小編根據大家提出的一些問題，來講解一下大腸菌羣平板計數法的注意事項。

方法選擇

相比於MPN計數法，平板計數法更適用於大腸菌羣含量較高的食品。但大腸菌羣多少算是含量較高呢？國標裏沒有明確規定，但通常認爲，產品大腸菌羣以100CFU/g（mL）爲界，超過這個含量一般認爲是含量較高。但具體什麼時候選用平板計數法進行大腸菌羣的檢測，大部分情況還是要看你的產品執行的標準。假如產品標準要求大腸菌羣含量的單位爲CFU/g（mL），那必須選用平板計數法。若是/g(mL)或者MPN/100g(mL)，就應選擇MPN計數法，MPN法具體選用哪版國標此處不再贅述。因此，根據自己產品的情況選擇適當的檢測方法。

培養基的要求

平板計數法使用的培養基爲結晶紫中性膽鹽瓊脂培養基，簡稱VRBA。無論是國標，還是培養基的使用說明中都明確表示，VRBA是不需要進行滅菌的，煮沸2min即可使用。特地點出這一點是因爲很多朋友都在問VRBA的滅菌條件，對不滅菌的培養基不信任，害怕出現檢測異常，那是因爲這些小夥伴們對其中的原理不清楚。大腸菌羣的定義是在一定培養條件下能夠在發酵乳糖、產酸產氣的需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌，因此大腸菌羣是不能形成芽孢的，在VRBA培養基煮沸的過程中，即使有大腸菌羣存在也會被殺滅，所以從培養基帶入污染的可能性是沒有的。當然盛裝培養基的容器是需要進行滅菌的，以免容器引入污染。另外，VRBA是一種選擇性的培養基，含有的結晶紫對革蘭氏陽性菌有比較強的抑制作用而對革蘭氏陰性菌幾乎沒有作用，而且平板培養產生的菌落還需要進行復發酵的驗證，因此VRBA培養基就不需要進行滅菌了。但值得注意的是，VRBA需要現配現用，配製出的培養基應當在3h之內使用完畢。

稀釋度的確定

國標中要求選擇2-3個適宜的連續稀釋度。什麼樣的稀釋度是合適的呢？這要根據計數來決定。計數環節要求選擇菌落數在15CFU-150CFU的平板進行計數，因此培養後菌落數在這個範圍內的稀釋度就是適宜的稀釋度。實驗室經常檢測的產品的大腸菌羣的水平檢測人員可以預計的，但是對盲樣，我們能做的只有根據實際情況多檢測幾個稀釋度了。這裏需要提一句，液體樣品的檢測稀釋度可以包括原液。

證實試驗

需要從VRBA平板上挑取10個不同類型的典型和可疑菌落，少於10個菌落的挑取全部的典型和可疑菌落進行BGLB肉湯管驗證。這裏挑取的菌落也是應當有選擇的，典型菌落和可疑菌落的比例應當與平板上培養的兩種菌落的比例相同或相近，這樣能夠降低檢測過程中的誤差。

計數的報告

報告過程是很多朋友存在疑問的地方，因爲平板計數法的結果報告需要結合培養基菌落數和復發酵驗證兩方面進行計算。存在疑問的情況主要有以下幾種：

1.所有稀釋度都不在計數範圍內怎麼辦？這種情況一般都是最低稀釋度的平板都小於15CFU，這種情況就是以最低稀釋度的平板菌落數乘以驗證試驗的比例來計算。例如10倍稀釋的兩個平板上菌落數分別爲10、8，菌落數爲10的平皿挑取10個菌落復發酵中有8個菌落產氣，菌落數爲8的平皿挑取8個菌落復發酵中有7個菌落產氣，則計算過程是這樣的：(10*8/10+8*7/8)/2*10=75CFU/g（mL）。

2.連續兩個稀釋度的四個平皿的菌落數都在計數範圍內怎麼辦？這個需要參考菌落總數檢測國標裏7.1.2裏的公式計算。我們需要先計算每個平皿的驗證後的菌落數，再代入公式計算即可。例如10倍稀釋度兩個平皿菌落數爲120和125,100倍稀釋度兩個平皿的菌落數爲17和16，經過復發酵驗證產氣的管數分別爲7、8、8、8，則我們先計算每個平皿上的菌落數分別爲120*7/10=84,125*8/10=100,17*8/10=13.6（我們計14），16*8/10=12.8（我們計13），然後將84、100、14、13四個數代入公式：（84+100+14+13）/（2+0.2）*10=959，結果應報告960CFU/g（mL）。

3.只有一個稀釋度的一個平皿的菌落數在計數範圍，其他均不在計數範圍怎麼辦？這樣我們只需要復發酵驗證這一個平皿即可，根據這一個平皿的菌落數進行報告。例如10倍稀釋度兩個平皿菌落數爲160和142,100倍稀釋度兩個平皿的菌落數爲12和13，則我們只需要從菌落數爲142CFU的平皿裏挑取10個菌落進行復發酵驗證即可，假如共有7支發酵管陽性，則應計算142*7/10=99.4，結果報告99CFU/g（mL）。