a-互补产生的lac'细菌很容易识别,因为它们在生色底物X-Gal的存在下形成蓝色菌落(Horwitz et al. 1964; Davies and Jacob 1968)。然而,一个外源DNA片段插入到质粒的多克隆位点几乎总是导致产生的氨基末端片段不再能够a-互补。

因此,携带重组质粒的细菌形成白色菌落。这个简单色彩试验的发展极大地简化了质粒载体中构建重组体的鉴定。这很容易筛选成千.上万的转化菌落,从它们的白色外观识别出那些被认为含有重组质粒的菌落。

然后,这些重组体的结构可以通过小量制备载体DNA,用限制性酶切分析或其他的鉴别标准进行验证。

为筛选细菌菌落,生色底物X-Gal和安慰诱导物IPTG (见信息栏“IPTG”和第1章中的信息栏“X-Gal")混合后用培养基适当稀释,结合熔化的顶层琼脂,然后铺在含有合适抗生素的琼脂平板上。

细菌铺在顶层琼脂上的转化效率稍高于铺在琼脂平板表面上。也许转化的细菌更喜欢软琼脂里稍微厌氧的状态或琼脂培养基提供的等渗透压。

IPTG ( isopropylthiogalactose)是由Mel Cohn在20世纪50年代初合成的- -系列半乳糖类似物之一,当时他在巴斯德研究院Jaques Monod的实验室工作。

lac 阻遏蛋白特异性结合lac 操纵子的操纵基因区,负调控大肠杆菌lac 操纵子的表达。IPTG结合lac阻遏蛋白,改变其构象使其无法结合lac 操纵基因,从而诱导乳糖操纵子的转录。

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