此载体含有: pAd10sacBII载体(图5-3)的部分遗传元件:一个卡那霉素抗性基因(kan"); 一个loxP位点:一个来源于PI噬菌体的复制子(PI质粒复制子),该复制子使载体在大肠杆菌中以低拷贝数质粒的方式复制:一个可诱导的复制子(P1裂解性复制子),能用于增加质粒的拷贝数:以及包含多个克隆位点的选择标记(sacB)。

酵母人工染色体

酵母人工染色体(YAC)的基础理论初次发表于1983年(Murray and Szostak 1983)。但是,直到1987年,随着YAC载体的发展,人们才充分认识到此项技术的重要性。这些载体能够使几百kb的DNA扩增,被用于构建哺乳动物基因组DNA的整体文库( Burke etal. 1987)。

将大片段的基因组DNA连接到YAC载体的两条“臂”上,以产生重组的YAC,然后将连接混合物通过转化的方法导入酵母。每一条臂都携带一个选择标记,以及按适当方向排列的、起端粒作用的DNA序列(Burke etal.1987)。

另外,其中一条臂上还携带着丝粒DNA片段和复制起始序列(亦称为“自主复制序列”,或ARS)。因此,在重组的YAC中,外源基因组DNA片段的一侧为着丝粒、复制起始序列及选择标记,另一侧为第二种选择标记。

通过在选择性琼脂平板上生长的菌落,可鉴定出接受并稳定保持人工染色体的酵母转化体。目前使用的大多数YAC载体设计为容易区分空载体( 也就是没有携带插入DNA)克隆及含有基因组DNA插入片段的载体的克隆(图5-3)。

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