並且不管是單獨還是綜合使用它們,都不能保證改善具有大量二級或三級結構的DNA擴增的有效性。正如此方案中描述的一樣,如果一些增強劑同時使用,那麼成功的機會就會增加。

此外,從商家可以購買含有添加劑的試劑盒。大多數試劑盒中除了其他未說明的添加劑,都默認含有甜菜鹼添加劑。

●改變PCR循環條件。如果聯合了降落PCR、熱啓動PCR及添加劑混合物都不能改善高GC模板的擴增,那麼改變循環條件可能會解決這個問題。

例如,Frey 等(2008)描述了一種聯合使用緩慢的升溫速率(2.5"C/s) 和緩慢的冷卻速率(1.5"C/s) 的方法來處理復性溫度。“緩慢降落”PCR技術的一一個基本組分是包含在反應混合物中的7-脫氮-2'脫氧鳥苷。

在以下的方案中,使用了4種添加劑混合物一甜菜鹼、 二硫蘇糖醇(DTT)、 二甲基.亞碸(DMSO)及牛血清白蛋白(BSA),該方案改編自Ralser 等(2006)出版的關於使用Taq DNA聚合酶方法。

當使用添加劑混合液時,要優化反應中模板DNA的量和Mg2 *濃度。有報道指出,高濃度的模板DNA會抑制高GC序列的擴增(Ralser et al. 2006)。

“多重PCR”是指同一PCR中用N對引物同時擴增N個靶序列,N>1。作爲從人類基因組DNA中篩選Duchenne型肌營養不良症(Chamberlinetal.1988)不同突變位點的一種有效方法,多重PCR現已被用於各種用途。

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