原標題：請收好這份細胞培養指南

啓蒙老師的重要性

一般進實驗室都有師兄師姐帶着做，他們就是你做細胞的啓蒙老師。他們的操作手法、細節、理論講解就成了你操作的準則，如營養液、細胞瓶的擺放位置；滅菌處理程序；開蓋手法；細胞吹打手法等等。要學會他們的正確操作，在第一次的時候就要重視。

好細胞要及時保種

細胞要分批傳代，這樣即使有一批出了問題，還有一批備用的。像後者一般人可能不容易做到。但這是我血的教訓，有一次細胞污染了，全軍覆沒。當時可後悔沒有保種。

每種細胞都有自己的特性，要區別對待。

細胞跟人一樣，不同的細胞，培養特性是不一樣的。培養過程中要細細體會。不同細胞株使用不同的培養基和血清。

如我養的平滑肌細胞很活躍，喜歡熱鬧，2~3 天就好多人口，而且不太愛喫喝，真是最好養的孩子了。內皮細胞和平滑肌細胞性格相近，不過它很不講衛生，也很邋遢，裏面有很多分泌屋，要經常換洗纔行。

RAW264.7 細胞也很開朗，而且很能喫，要經常餵它，頭疼的是細胞很容易活化，培養它的瓶子和環境沒有內毒素纔好，不過我這個當媽的很難滿足它了。

培養前的工作準備充分

包括耗材的處理、試劑的配置，無菌檢驗等等。

• 玻璃器皿的清洗。對於玻璃器皿（細胞瓶、裝營養液的瓶子、小青黴素瓶等）要先用洗衣粉刷乾淨（注意死角），然後衝乾淨。用酸液浸泡 24 h 以上，之後用清水沖洗 10 遍，除去殘留酸液。瓶子之類，沖洗過程要使勁搖晃。然後在雙蒸水浸泡 24 h。晾乾後包紮，160℃ 幹烤 2 h 待用。
• 試劑配置。細胞培養用的液體一般使用雙蒸以上的水即可。並注意 pH 值的調節。
• 無菌檢驗。主要採用過濾除菌：如胰酶、抗生素、G-418 溶液、各類培養基、丙酮酸鈉、谷氨醯胺等。有些可以採用高壓滅菌：如 PBS、D-Hank's等。

試劑分裝保存

包括營養液、胰酶、血清等。

血清特別重要。血清必須貯存於 –20℃，如果一次無法用完一瓶，可將 40～50ml 分裝於無菌酸處理瓶中，甚至置青黴素瓶保存。一般廠商提供的血清爲無菌，不需再無菌過濾。若發現血清有許多懸浮物，則可將血清加入培養基內一起過濾，勿直接過濾血清。（一般情況下不影響細胞培養）

瓶裝血清一定要逐步解凍: 4℃ 冰箱全溶後再分裝，在溶解過程中須規則搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一，減少沉澱的發生。勿直接由 –20℃ 直接至 37℃ 解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質凝結而發生沉澱。

熱滅活是指 56℃，30 分鐘加熱已完全解凍之血清。水浴鍋升到 56℃後，將血清放入，待溫度升高到 56℃ 後計時，一般 5 分鐘左右規則搖晃均勻一次。此熱處理之目的是使血清中之補體成份去活化。除非必須，一般不要作此熱處理，因爲會造成沉澱物之顯著增多，且會影響血清之品質。注意更換新血清（包括不同批次）對細胞的影響。

無菌意識要強

實驗進行前，超淨臺以紫外燈照射 30 分鐘滅菌，以 70 % ethanol 擦拭無菌操作抬面，並開啓超淨工作臺風扇運轉數分鐘後，纔開始實驗操作。

每次操作只處理一株細胞株，以避免失誤混淆或細胞間污染。實驗完畢後，將實驗物品帶出工作臺，以 70 % ethanol 擦拭無菌操作抬面。

無菌操作工作區域應保持清潔及寬敞，必要物品，例如支架、吸管等公用物品可以暫時放置，其它個人實驗用品用完應立即拿出。實驗用品以 70% 乙醇擦拭後才帶入無菌操作檯內。實驗操作應在中央無菌區域，一般勿在邊緣區域操作。

小心取用無菌之實驗物品，避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口，亦不要在打開之容器正上方操作實驗。容器打開後，以手夾住瓶蓋並握住瓶身，傾斜約 45° 角取用，儘量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。